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极速的产品周期
可为冷冻电镜三维结构解析提供高质量蛋白样本
从序列到结构的“一站式”服务降低运输对蛋白的影响
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问题1:外源基因在原核中表达的关键
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问题2:为什么要进行密码子优化?
问题2:为什么要进行密码子优化?
问题3:克隆载体和表达载体有什么区别?
问题3:克隆载体和表达载体有什么区别?
问题4:哪些载体做亚克隆难度较大?
问题4:哪些载体做亚克隆难度较大?
(1)表达载体将外源基因导入宿主菌,指导宿主菌的酶系统合成外源蛋白;
(2)外源基因不能带有内含子;
(3)利用原核细胞的强启动子和SD序列等控制外源基因的表达;
(4)外源基因与表达载体连接后,必须形成正确的开放阅读框架;
(5)利用宿主菌的调控系统,调节外源基因的表达,防止表达的外源基因产物对宿主菌的毒害。
密码子优化是基因表达优化的关键步骤之一,基因序列GC含量比例不当、序列中的终止密码子、转录后mRNA的二级结构、核糖体结合位点以及密码子偏爱性等,这些都会影响到蛋白表达。
克隆载体:都有一个松弛的复制子,能带动外源基因在宿主细胞中复制扩增,用于克隆和扩增DNA片段(基因)的载体。
表达载体:具有克隆载体的基本元件(Ori、Ampr、Mcs等),还具有转录/翻译所必须的DNA序列的载体,用于将目的基因转录翻译成蛋白质。
载体比较大、低拷贝载体、背景不明确的载体、自杀性载体和抗性特殊的载体,亚克隆难度比较大。例如:pCAMBIA-1301、pBI121、pKSV7、pMG36e(红霉素抗性)和pCYT(氯霉素抗性)等
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