冷冻电镜


应用冷冻固定技术,低温下使用透射电子显微镜观察样品,从而得到分子的结构的显微技术。将含水生物样品快速冷冻并用电子束照射。检测器检测电子的散射方式,最后利用三维重构的技术得到样品的三维结构

服务流程

资源 2@2x
工作區域 2

STEP 1: 样品制备

蛋白质样品纯化后,对纯化样品进行冷冻制样。在整个实验过程中保持在大约-190℃或是80K的温度。
工作區域 1

STEP 2: 成像

300kV透射电子显微镜 Titan Krios G3i 
BioQuantum GIF
K3 camera/Falcon 3EC
Cs corrector
Volta Phase Plate
X-FEG电子光源

工作區域 3

STEP 3: 建立模型

使用我们的高性能计算机和eTas、AutoEMation软件进行数据收集,通过MotionCorrection漂移矫正后进行2D成像和图像筛选,再通过THUNDER搭建三维结构模型,最后经过进一步优化得到目的蛋白三维结构。

样品类型

1
小分子化合物
圆图
膜蛋白
3
抗体-抗原复合物
4
蛋白质-配体复合物
5
6
噬菌体
aav
腺相关病毒载体(AAV)
8
纳米材料

常见问题

  • 您只有少量的样品;
  • 您的样品很难结晶;
  • 您研究对象是一个大的生物分子复合物(>150kDa);
  • 您想观察真正的“原生状态”结构。
(1)冷冻速率不够;
(2)冷却剂的温度未接近凝点;
(3)容器边缘的小冰晶坠入液氮中,粘附在样品上或在样品转移过程,空气中的水分子凝结在样品表面。

使用我们的高性能计算机和eTas、AutoEMation软件进行数据收据,通过MotionCorrection漂移矫正后进行2D成像和图像筛选,再通过THUNDER三维重构,将其重构为满足物理和立体化学原理的三维结构模型。 (我们的科学家对诸如膜蛋白这样具有挑战性的目标也非常有经验,可以通过手动干预来改善甚至重建初始模型)。建立初始模型后,再通过调整原子坐标、B因子和其他参数进一步优化以最大程度地提高模型与实验观察值之间的一致性。


业务流程

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